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Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit

Cat #:GK3603-20T/GK3603-50T

一、试剂盒组成、规格、储存：

成分 20T 50T 储存

AnnexinV-FITC 100μl 250μl -20℃避光保存

Propidium Iodide 100μl 250μl 4℃避光保存

Binding Buffer 10ml 25ml 4℃保存

二、产品简介：

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细

胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。

Annexin V 是一种分子量为 35~36kD 的 Ca 2+ 依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝

氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜

结合。因此 Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将 Annexin V 进行

荧光素 FITC 标记，以标记了的 Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细

胞仪可检测细胞凋亡的发生。

碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，

但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将

Annexin V 与 PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit)

是用FITC 标记重组人 Annexin V 来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷脂酰丝氨

酸的一种细胞凋亡试剂盒。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备

进行检测。

本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。

三、自备试剂及仪器

流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器、1.5m L Microtube、载玻

片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、不含 EDTA 的胰酶消化液。

四、使用方法（仅供参考）：

1、悬浮细胞离心（2000rpm 离心 5min）收集；贴壁细胞用不含 EDTA 的胰酶消化

收集（注：胰酶消化时间不易过长，否则容易引起假阳性）；

2、用 PBS 洗涤细胞二次（2000rpm 离心 5min）收集 1~5×10 5 细胞；

3、加入 500μL 的 Binding Buffer 悬浮细胞；

4、加入 5μL Annexin V-FITC 混匀后，加入 5μL Propidium Iodide，混匀；

5、室温、避光、反应 5～15min；

6、请在 1h 内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。

A．荧光显微镜观察

1、滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；

2、对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；

(1)将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；

(2)用 PBS 洗涤细胞两次；

(3)在 500μL 的 Binding Buffer 中加入 5μL Annexin V-FITC，5μL Propidium

Iodide，混匀；

(4)将上述溶液滴加于盖玻片表面，使盖玻片表面均匀覆盖；

(5)避光、室温反应 5 min。

(6)将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下、双色滤光片（FITC 和罗丹明）观

察。Annexin V-FITC 荧光信号呈绿色，PI 荧光信号呈红色。

B．流式细胞仪分析

1、用流式细胞仪检测，激发波长 Ex=488 nm; 发射波长 Em=530 nm。

2、Annexin V-FITC 的绿色荧光通过 FITC 通道（FL1）检测；PI 红色荧光（流式

Ex=488nm,Em≥630nm）通过 FL2 或 FL3 通道检测，建议使用 FL3。

3、荧光补偿调节：使用未经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节

去除光谱重叠和设定十字门的位置。

五、储存条件

1、Annexin V-FITC组份建议按需分装小份冻存于-20℃，避免反复冻融；

2、Propidium Iodide和Binding Buffer组份不用时可放置于4℃保存，Propidium Iodide

需要避光；

3、一年有效。

六、注意事项

1、AnnexinV-FITC、Propidium Iodide 取用前请低速离心。

2、本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于 1×10 5 ，

不推荐用于检测组织样本。

3、推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含 EDTA 的胰酶消化，如消化

不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将

胰酶消化后细胞的保存在含 2%BSA 的 PBS 中，防止进一步的损伤。

4、细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。

5、因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧

光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，

进行荧光补偿的调节。

4、PI 对人体有刺激性，请注意适当防护。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

七、实验范例

附：细胞培养常用试剂

编号 名称 规格

GR3101-500ML 1640 medium 培养液 500ml

GD3103-500ML DMEM,high glucose 高糖培养液 500ml

GH3106-500ML D-Hank’s 液(不含 Ca2+ Mg2+ 含酚红) 500ml

GH3116-500ML D-Hank’s 液(不含 Ca2+ Mg2+ 不含酚红) 500ml

GH3107-500ML Hank’s 液(含 Ca2+ Mg2+ 含酚红) 500ml

GH3117-500ML Hank’s 液(含 Ca2+ Mg2+ 不含酚红) 500ml

GP3108-100ML 0.25%胰蛋白酶消化液（含 EDTA） 100ml

GP3109-100ML 0.25%胰蛋白酶消化液（不含 EDTA） 100ml

GA3502-100ML 青链霉素混合液（100×） 100ml

GP3302-500ML D-PBS 500ml

GS3303-100ML 碳酸氢钠溶液 100ml

GG3304-10ML L-谷氨酰胺（100×） 10ml

GH3301-10ML HEPES 溶液（1mol/L） 10ml

GC3305-50ML 细胞冻存液 50ml

GK3601-50T 细胞凋亡与周期检测试剂盒 （单染） 50T

GK3603-20T 细胞凋亡-Annexin V-FITC/PI 检测试剂盒（双染） 20T

GK3603-50T 细胞凋亡-Annexin V-FITC/PI 检测试剂盒（双染） 50T

GK3605-500T MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 500T

GK3607-500T CCK-8 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 500T

GC3310-100ML 流式细胞保存液 100ml