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  BCA 蛋白浓度测定试剂盒

产品简介：

BCA 蛋白定量法是一种快速灵敏、稳定可靠的蛋白定量测定方法，其测定范围是 10－

2000μg/ml，是比 Lowry 法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。BCA 法测定蛋白浓度

不受绝大部分样品中的化学物质的影响。其在 562nm 处有最大的吸收值，通过与标准曲线

对比，即可计算待测蛋白的浓度。

原理：

BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂，混合一起显示为

苹果绿色，即 BCA 工作试剂。在碱性条件下，BCA 与蛋白质结合时，蛋白质将 Cu 2+ 还原为

Cu + ，一个 Cu + 螯合二个 BCA 分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物，最大光吸收

强度与蛋白质浓度成正比。

试剂盒组成：

BCA01(50ml) 0 BCA02(100 ml)

试剂 : A:BCA 碱性溶液 50ml 100ml

试剂 B:硫酸铜溶液 1ml 1ml×2

试剂 : : C:标准 BSA 蛋白（1mg/ml） 1ml 1ml×2

l 1.5ml 离心管 25 个 50 个

说明书 1 份 1 份

试剂盒保存：

试剂 A 和试剂 B 室温保存。试剂 C（标准 BSA 蛋白），为避免反复冻融导致蛋白降解，

建议分装成小管-20℃保存。

测定方法 1 1 1 1： ： （试管法）

1、配制工作液：根据标准品和样品数量，按 50 体积试剂 A，1 体积试剂 B 配制适量 BCA 工

作液，充分混匀。注意：BCA 工作液室温 24 小时内稳定。工作液配制的量要与测定所用

的比色杯对应。每个测定要做 2-3 个平行反应。本处列举的比色体系所用的是 0.5ml 的比

色杯；如果没有 0.5ml 比色杯，反应体系需要放大到实验将采用的比色杯准确读数所需要

的体积。

2、BSA 标准品和样品的准备：样品用水或其它不干扰显色反应的缓冲配置，使待测定的浓

度位于标准曲线的线性部分。每个反应准备 3 个平行测定。标准曲线一般 5-6 个点即可 ，

根据样品的估测浓度确定各点的具体浓度。稀释 BSA 时,可以用水或与样品一致溶液。如

待测定的浓度为 200μg/ml 左右，按下表的次序加入 BSA 标准品、样品及 BCA 工作液。

3、取适当体积的标准蛋白（蛋白样品）以蛋白液：工作液为 1：20 的比例混匀，37℃温浴

30min，冷却至室温。

4、将样品与标准品在 562nm 波长下测定吸光度。

5、绘制标准曲线，计算样品的浓度。注意：实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。

1 2 3 4 5 6 7

待测样品

稀释 1

待测样品

稀释 2

BSA (μl) 0 2.5 5 10 15 20 25

H 2 O (μl) 25 22.5 20 15 10 5 0 0 0

工作液(μl) 500 500 500 500 500 500 500 500 500

OD 562

OD 562 平均值

测定方法 2 ： （96 孔板）

1、配制 BCA 工作液：根据标准品和样品数量，按 50 体积试剂 A，1 体积试剂 B 配制适量

BCA 工作液，充分混匀。

2、将蛋白标准品按 0、1、2、4、6、8、10μl 加到 96 孔板的蛋白标准品孔中，加灭菌双蒸

水补足到 10 微升；取 10 微升待测样品加入 96 孔板。每个测定要做 2-3 个平行。

3、向带测样品孔和蛋白标准品孔中加入 200μl BCA工作液（即样品与工作液的体积比为 1：20）混匀。

4、37℃温浴 30min。冷取至室温。

5、酶标仪 562nm 波长下测定吸光度。

6、绘制标准曲线，计算样品的浓度。注意：实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。

注意事项：

1、反应颜色的深浅除了与样品的蛋白质浓度相关外，还与反应的温度有关。如果样品的浓

度较高（>50μg/ml），反应温度一般采用 37℃。如果样品蛋白质的浓度较低（<50μg），

反应的温度为 60℃，该温度下，色氨酸、酪氨酸和肽键得到充分氧化，大大提高检测灵

敏度。

2、当蛋白浓度＜20μg/ml 时，推荐 60℃温浴，并将蛋白液：工作液的比例调至 1：8 进行测

定（增强法）可以检测到 5ug/ml。