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                支原体检测试剂盒 ( 荧光法)

Cat #: GK3612-100T

一、试剂盒组成、规格、储存：

          成分                       100T                 储存

Hoechst 33258 工作液    100ml           4℃避光保存

固定液                             100ml           4℃保存

抗荧光淬灭封片剂             10ml            4℃避光保存

说明书 一份

二、产品简介：

本试剂盒是利用荧光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）检测支原体污染。这种

染料会结合到 DNA 的 A-T 富集区域，因为支原体的 DNA 中 A-T 含量高（55％～

80％），所以可将其染色而被检测到。被支原体污染的细胞经染色后在细胞周围可

看到许多大小均一的荧光小点，即为支原体的 DNA 染色斑，说明有支原体污染。

Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为 460nm；Hoechst 33258

和双链 DNA 结合后，最大激发波长为 352nm，最大发射波长为 461nm。

三、 注意事项 ：

1、Hoechst 工作液对人体有害，请注意防护。

2、固定液有刺激性气味，建议在通风橱进行固定。

3、支原体检测时，最好用不含抗生素的培养液培养 2～3 代，比较容易避免假阴性

结果。

4、本试剂盒用于 6 孔板检测时，可以进行 50 次检测反应。

5、检测支原体污染，可以使用支原体高效 Vero 细胞，这样可以提高检测灵敏度，

即将被检测样品接种于 Vero 细胞进行检测。

四、使用方法（仅供参考）：

贴壁细胞：

1、被检细胞接种于无菌的 6 孔或 24 孔细胞培养板中，接种密度为 1-2×10 4 。同时 ，

接种正常无支原体感染的同种细胞，作为阴性对照。或者将正常生长细胞消化成

单个细胞，将细胞悬液接种 24 孔细胞爬片上。

2、培养 5 天后，先吸去培养液，再加入 1ml 的固定液，静置 20min。

3、吸去固定液，晾干。

4、于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液须覆盖全部

被检细胞），37℃避光放置 15-20min 或室温静置 20～30min。

5、吸去 Hoechst 33258 工作液，加入 2ml 灭菌超纯水洗涤三次，直接风干。风干后

加入一滴封片液，并以盖玻片覆盖或将爬片置于载玻片上。

6、荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠

状荧光小点。

悬浮细胞：

1、收集需检测的细胞，1500rpm，5min。

2、将收集的细胞涂片于载玻片上，再加 1ml 的固定液，静置 20min。

3、吸去固定液，晾干。

4、于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液须覆盖全部

被检细胞），37℃避光放置 15～20min 或室温静置 20～30min。

5、吸去 Hoechst 33258 工作液，用无菌水洗涤玻片 3 次，直接风干。风干后加入一

滴封片剂，并以盖玻片覆盖。

6、荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠

状荧光小点。

结果判断（参考）：

阴性：仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。

阳性：除细胞外，细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。