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MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
t Cat #:GK3605-250T
一、试剂盒组成、规格、储存：
成分 250T T T T 储存
MTT Solution 5ml（1ml×5） -20℃避光保存
Formazan dissolution 40ml（20ml×2） 2-25℃保存
二、产品简介：
MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity
Assay Kit）是一种被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的实验方法。由于细胞活力与
细胞数呈正相关，因此常常用来检测细胞的增殖情况。MTT 可以被线粒体内的一些
脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物 Formazan。在特定溶剂存在的情况下，可以被
完全溶解。然后通过酶标仪可以测定 490nm 波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快 ，
则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
三 、注意事项
1、由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。由
于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取加PBS、水或培养液防止实验孔蒸发；
另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，减缓蒸发；
2、Formazan dissolution结冻时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解
并混匀后使用；
3、MTT Solution孵育时，需避光；
4、使用时如发现Formazan dissolution呈绿色，则不可使用，尽量避免反复冻融影响
品质。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
四、储存条件
MTT Solution 需-20℃保存，Formazan dissolution 低温结晶，可 4℃储存，也可
室温储存。
运输温度 4℃。
五 、使用方法（仅供参考）：
1、普通 MTT 法实验步骤：（以做贴壁细胞生长曲线为例）
1）胰蛋白酶消化细胞成单细胞悬液；
2）接种细胞：用含 10%FBS 培养基配成单个细胞悬液，以每孔 1000-10000 个（不
同系细胞生长速度不同，接种密度不同）接种到 96 孔板（平底板），每孔培养
液体积 200ul。
3）培养细胞：同样的培养条件，连续培养 3-5 天。
4）呈色反应：培养过程中，每隔 12h 或 24h 取出一个 96 孔板，每孔加入 20ul MTT
Solution，继续孵育 4 h。
5）终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养
上清液。每孔加 150ul Formazan dissolution，振荡 10min，使结晶物充分融解。
6）比色：选择 490nm 波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以
时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
2、药物毒性 MTT 法实验步骤（贴壁细胞）：
1）胰蛋白酶消化细胞成单细胞悬液；
2）接种细胞：收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入 100ul,铺板使待测细
胞调密度 1000-10000 个/孔。
3）细胞培养并加药：5%CO 2 ，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96 孔平底板），加
入浓度梯度的药物，原则上细胞贴壁后即可加药，一般 5-7 个梯度，每孔 100ul ，
设 3-6 个复孔，建议设 6 个。
4）同时设置调零孔（培养基、MTT Solution、Formazan dissolution），对照孔（细胞 、
相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT Solution、Formazan dissolution）。
5）5%CO 2 ，37℃孵育 16-48h，倒置显微镜下观察细胞形态。
6）为了避免加入的药物可能与 MTT 发生反应影响试验结果，加入 MTT 溶液前更换
新鲜培养基，每孔 180ul。
7）呈色反应： 每孔加入 20ul MTT Solution，继续培养 4h。
8）终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，每孔加 150ul Formazan dissolution，振荡
10min，使结晶物充分融解。
9）比色：选择 490nm 波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。
* 如果所用细胞是贴壁性不强的细胞或是悬浮细胞 ， 则在每一步需要换液加药 ， 吸上
用 清液之前先离心后在进行操作。建议使用 GK3607 （ l Cell g Counting Kit-8 ）。
