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           Karrol RNA Reagent
            总 RNA 提取试剂
           目录号：K3102

用户需自备的试剂材料和准备工作
（1）请事先准备好 75%乙醇、氯仿（或 Karrol mate）、1.5ml Eppendorf 管（RNase-free）若干。RNase 酶非常稳定，是导致 RNA 降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时灭活，但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能使 RNase 完全失活，它广泛存在于人的皮肤上，因此，在进行与 RNA 制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。（2）RNase 的又一次污染是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理，一般情况下采用 RNase-free水配制的 70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。取 RNase-free 的物品时必须戴手套。尽可能使用无菌，一次性塑料制品。 从组织中提取总 RNA1.液氮研磨:组织块之间放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加入少量液氮，再研磨，如此三次，按 50-100 mg 组织/ml Karrol 加入 Karrol，转入离心管进行第四步操作。2.匀浆：组织样品按 50-100 mg 组织/ml Karrol 加入 Karrol。另外，组织体积不能超过 Karrol 体积的 10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆机充分匀浆需要 1-2 分钟。3.从细胞中提取总 RNA培养贴壁细胞：不需消化，可直接用 Karrol 进行消化、裂解，Karrol 体积按 10 cm2/ml 比例加入。4.悬浮细胞可直接收集、裂解，每 1ml Karrol 可裂解 5×106 动物、植物或酵母细胞，或者 107细菌细胞。 操作步骤1. 细胞或组织匀浆液加 Karrol 后，室温放置 5min，使其充分裂解。注：此时可放入-70℃长期保持。2. 按 200 μl 氯仿/ml Karrol 加入氯仿（或按 400 μl Karrol mate/ml Karrol 加入 Karrol mate），振荡混匀后室温放置 5-15min。注：禁用漩涡振器，以免基因组 DNA 断裂。对于脂肪组织，加入 400 μl 氯仿/ml Karrol（或加入 800 μl Karrol mate/ml Karrol）。3. 4℃，12000g 离心 15 min4. 吸取上层水相，至另一离心管中。注：千万不要吸取中间界面；若同时提取 DNA 和蛋白质，则保留下层酚相于 4℃冰箱。Karroten5. 按 0.5ml 异丙醇/ml Karrol 加入异丙醇混匀（异丙醇体积与水相体积相当），室温放置 1-5min。6. 4℃ 12000g 离心 10min，弃上清，RNA 沉于管底。7. 按 1ml 75%乙醇/ml Karrol 加入 75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。8. 4℃ 8000g 离心 5min，尽量弃上清。9. 室温晾干或真空干燥 1-5min，注：RNA 样品不要过于干燥，否则很难溶解。10. 可用 50-100 μl RNase-free 的 H2O 或 TE buffer 溶解 RNA 样品。11. （可选）测 OD 值定量 RNA 浓度。注：此方法提取 RNA A260/A280 值在 1.6-1.8 之间（TE 中会高些）；产率估计：组织样本：（μg RNA/mg 组织）1-10 μg，培养细胞（μg RNA / 106 Cell）：5-15 μg。12. RNA 应尽快做下游实验。

Karrol总RNA提取试剂是一款经典的总RNA 提取试剂，具有极好的稳定性和可重复性，且性价比超好。其优秀程度可与Trizol试剂对标，毫不逊色。

更加出色的是Karrol伴侣，可以完全替代RNA提取步骤中必需的氯仿。众所周知，由于氯仿的毒性，其被列为管制品试剂，各实验室要想使用，须经复杂的申请流程，获取麻烦且费时，经常耽误实验进度。有了Karrol伴侣一切都不同了，它不受管制，效果稳定，让实验变得轻松安全。

安全警告：
有毒物接触皮肤或者不慎吞服会导致灼伤。一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗。若感不适，看医生并寻求苯酚和其他成分的正确治疗方案。