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细胞凋亡 t Hoechst 检测试剂盒
Cat #:GK3615-50T/ GK3615- 100T
一、试剂盒组成、规格、储存：
成分 50T 100T T T T 储存
Hoechst 33258 染色液 25ml 50ml 4℃避光保存
固定液 25ml 50ml 4℃保存
抗荧光淬灭封片液 2.5ml 5ml 4℃保存
二、产品简介：
Hoechst 33258 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst
33258 为特异性 DNA 染料，与 A-T 键结合，这种染料对死细胞或经固定的细胞可立即
染色。而活细胞的着色是渐进性的，在 10min 内可达饱和。Hoechst 33258 的最大激发波
长为 346nm，最大发射波长为 460nm；Hoechst 33258 和双链 DNA 结合后，最大激发波
长为 352nm，最大发射波长为 461nm。
细胞发生凋亡时，染色质会固缩。所以 Hoechst 33258 染色后，在荧光显微镜下观
察，正常细胞的细胞核呈正常的蓝色，而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状
致密浓染，颜色有些发白。
三 、产品 特点 ：
1、简单快速。
2、提供了固定液，染色液，及抗荧光淬灭封片液。
3、对贴壁细胞，悬浮细胞和组织切片均适用。
四、自备试剂及仪器
可以观察蓝色荧光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜、PBS 或 0.9% NaCl 溶液、低
速离心机、移液器、1.5mL 离心管、载玻片、盖玻片。
五 、储存条件
1、4℃保存，Hoechst 33258染色液需避光保存。
3、一年有效。
六 、使用方法（仅供参考）：
1、贴壁细胞
1）取洁净盖玻片在 70%乙醇中浸泡 5 分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用无菌的
PBS 或 0.9%NaCl 等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板
内，种入细胞培养过夜，使约为 50%-80%满。
2）刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入 0.5ml 固定液，固定 10 分钟或更长时间(可
4ºC 过夜)。
3）去除固定液，用 PBS 或 0.9% NaCl 洗两遍，每次 3 分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇
床，或手动晃动。
4）加入 0.5ml Hoechst 33258 染色液，染色 5 分钟。用摇床，或手动晃动数次。
5）去除染色液，用 PBS 或 0.9% NaCl 洗两遍，每次 3 分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇
床，或手动晃动。
6）滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液 ，
尽量避免气泡。
7）荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长 350nm 左右，发射波长 460nm 左右。
2、悬浮细胞
1）离心收集细胞样品于 1.5ml 离心管内，加入 0.5ml 固定液，缓缓悬起细胞，固定 10
分钟或更长时间(可 4ºC 过夜)。
2）离心去固定液，用 PBS 或 0.9% NaCl 洗两遍，每次 3 分钟。洗涤期间手动晃动数次。
3）离心后吸去大部分液体，保留约 50μl，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使
细胞分布均匀。
4）稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
5）均匀滴加 0.5ml Hoechst 33258 染色液，染色 5 分钟。用吸水纸从边缘吸去液体，微
晾干。
6）去染色液，用 PBS 或 0.9% NaCl 洗两遍，每次 3 分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床 ，
或手动晃动。
7）滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
8）荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长 350nm 左右，发射波长 460nm 左右。
3、组织切片
1）常规包埋切片后，根据切片的不同类型，处理至可以用于免疫组化染色。
2）PBS 或 0.9% NaCl 洗两遍，每次 3 分钟，吸尽液体。洗涤时用摇床，或手动晃动 。
可在六孔板中操作。
3）加入 0.5ml Hoechst 33258 染色液，染色 5 分钟。用摇床，或手动晃动数次。
4）去染色液，用 PBS 或 0.9% NaCl 洗两遍，每次 3 分钟，吸尽液体。洗涤时用摇床 ，
或手动晃动。
5）小心将切片置于载玻片上，滴一滴抗淬灭封片液，盖上一洁净的盖玻片，尽量避
免气泡。
6）荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长 350nm 左右，发射波长 460nm
左右。
七 、注意事项
1、荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
2、在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
附：细胞培养常用试剂
编号 名称 规格
GR3101-500ML 1640 medium 培养液 500ml
GD3103-500ML DMEM,high glucose 高糖培养液 500ml
GH3106-500ML D-Hank’s 液(不含 Ca 2+ Mg 2+ 含酚红) 500ml
GH3116-500ML D-Hank’s 液(不含 Ca 2+ Mg2 + 不含酚红) 500ml
GH3107-500ML Hank’s 液(含 Ca2 + Mg 2+ 含酚红) 500ml
GH3117-500ML Hank’s 液(含 Ca 2+ Mg 2+ 不含酚红) 500ml
GP3108-100ML 0.25%胰蛋白酶消化液（含 EDTA） 100ml
GP3109-100ML 0.25%胰蛋白酶消化液（不含 EDTA） 100ml
GA3502-100ML 青链霉素混合液（100×） 100ml
GP3302-500ML D-PBS 500ml
GS3303-100ML 碳酸氢钠溶液 100ml
GC3305-50ML 细胞冻存液 50ml
GK3601-50T 细胞凋亡与周期检测试剂盒 （单染） 50T
GK3602-100T 细胞凋亡- Hoechst 33342/PI 检测试剂盒（双染） 100T
GK3603-50T 细胞凋亡-Annexin V-FITC/PI 检测试剂盒（双染） 50T
GK3605-500T MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 500T
GK3607-500T CCK-8 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 500T
GK3610 JC-1 线粒体膜点位检测试剂盒 ＞100T
GK3611 活性氧检测试剂盒（DCFH-DA） ＞100T
GK3612-100T 支原体检测试剂盒（荧光法） 100T
GK3614 支原体清除剂 1ml
GK3615-100T 细胞凋亡 Hoechst 检测试剂盒 100T
